Vitaminas A kraujyje

Vitamino A (retinolio) koncentracijos kraujo serume pamatinės vertės (norma): 1-6 metų vaikams – 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 metų – 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 metų – 0,91-2,51 μmol/l; suaugusiesiems – 1,05-2,09 μmol/l.

Vitaminas A yra riebaluose tirpus vitaminas, egzistuojantis dviem formomis: pats vitaminas A, arba retinolis (randamas tik gyvūninės kilmės produktuose), ir provitaminas A, žinomas kaip karotinas (gaunamas iš gyvūninės ir augalinės kilmės produktų), kuris virškinamojo trakto sienelėse gali būti paverstas retinoliu. Maždaug 50–90 % su maistu gaunamo retinolio absorbuojama plonojoje žarnoje ir chilomikronais surištame komplekse pernešama į kepenis, kur kaupiamas kaip retinolio palmitatas. Prireikus jis išsiskiria į kraują retinolio ir vitamino A surišančio baltymo komplekso pavidalu. Kraujo serume vitamino A surišančio baltymo ir retinolio kompleksas jungiasi su transtiretinu. Iš kraujo serumo retinolį pasisavina tikslinės ląstelės, tokios kaip tinklainės ir epitelio fotoreceptoriai.

Kai organizmas gauna vitamino A daugiau, nei reikia (180–430 mcg retinolio per parą, priklausomai nuo amžiaus, lyties ir fiziologinės būklės), jo perteklius nusėda kepenyse, susidarant šio vitamino depui. Sumažėjus retinolio suvartojimui su maistu, jo atsargos iš kepenų išsiskiria į kraują, palaikydamos normalią retinolio koncentraciją kraujo serume (virš 0,7 μmol/l). Kitų biologiškai aktyvių vitamino A formų (retinalo ir retinoinės rūgšties) kraujyje yra labai mažomis koncentracijomis (mažesnėmis nei 0,35 μmol/l); retinolio esteriai sudaro maždaug 5 % viso vitamino A kiekio (0,1–0,17 μmol/l).

Vitaminas A atlieka svarbų vaidmenį oksidacijos-redukcijos procesuose. Retinolis skatina glikogeno susidarymą kepenyse ir raumenyse, padeda didinti cholesterolio kiekį kraujyje ir dalyvauja steroidinių bei lytinių hormonų sintezėje. Jis būtinas skeleto sistemos augimui ir formavimuisi, rodopsino resintezei, taip pat skatina normalų gleivinių ir odos epitelio funkcionavimą, užkertant kelią jo metaplazijai, hiperkeratozei ir per dideliam odos lupimuisi. Vitaminas A padeda stiprinti plaukus, dantis ir dantenas. Pastaraisiais metais buvo įrodytas įvairiapusis vitamino A vaidmuo užkertant kelią vėžiui ir reguliuojant imunitetą (jis būtinas fagocitozei užbaigti, didina Ig sintezę, stimuliuoja T-žudikų susidarymą, stimuliuoja II tipo T-helperus ir kt.). Vitaminas A yra aktyvus antioksidantas, daugiausia veikiantis esant vitaminui E; jis apsaugo vitaminą C nuo oksidacijos. Vitamino A trūkumas laikomas piktybinių navikų rizikos veiksniu. Eksperimentiniai tyrimai parodė, kad padidinus vitamino A kiekį maiste, vidutinė gyvenimo trukmė pailgėja 17,5 %. Cinkas yra būtinas vitamino A metabolizmo kofaktorius (būtinas vitaminą A surišančio baltymo sintezei).

Vidutinis retinolio paros poreikis suaugusiesiems (20–50 metų) yra 1,2 mg (4000 TV, 1 TV atitinka 0,3 mcg retinolio), nėščioms moterims – 1,5 mg (5000 TV), krūtimi maitinančioms moterims – 1,8 mg (6000 TV), vyresniems nei 60 metų žmonėms – 2,5 mg (10 000 TV). Bent trečdalis retinolio paros poreikio organizmas turėtų gauti paruošto produkto pavidalu; likusią dalį galima padengti vartojant karotenoidus, iš kurių organizme susidaro retinolis. Reikėtų atsižvelgti į tai, kad terminio apdorojimo metu sunaikinama apie 30 % maisto produktuose esančio retinolio. Retinolio aktyvumas yra 2 kartus didesnis nei karotino, be to, žarnyne absorbuojama tik 30–40 % pastarojo. Todėl vertinant mitybą manoma, kad 1 mg retinolio atitinka maždaug 6 mg karotinoidų.

Retinolio (vitamino A) ir karotinoidų nustatymas kraujo serume pagal Bessey metodą, modifikuotą L. Anisimovos

Metodo principas

Vitamino A ir karotinoidų nustatymas pagrįstas jų hidrolize šarminiame alkoholio tirpale, po kurios seka ekstrakcija organinių tirpiklių mišiniu.

Reagentai

• 11 M kalio hidroksido (KOH) tirpalas.
• 96 % etilo alkoholio.
• 1 M kalio hidroksido (KOH) tirpalas 96 % etilo alkoholyje: 1 tūris 11 M KOH tirpalo sumaišomas su 10 tūrių dalių 96 % etilo alkoholio. Reagentas paruošiamas tyrimo dieną. Jei maišant atsiranda spalvos pakitimas, prieš naudojimą alkoholį reikia išgryninti distiliuojant.
• Ksilenas, chemiškai grynas
• Oktanas, chemiškai grynas
• Ksileno ir oktano mišinys: paruošiamas sumaišant vienodus ksileno ir oktano tūrius.

Tyrimai atliekami naudojant spektrofotometrą.

Vitamino A nustatymo procesas

Iš piršto paimtas kraujas (apie 1 ml) supilamas į centrifugos mėgintuvėlį ir 20–30 minučių laikomas stikliniame puodelyje su šiltu vandeniu (temperatūra 40–45 °C). Serumui atskirti kraujo krešulys plonu stikliniu lazdele atsargiai perbraukiamas aplink mėgintuvėlio sienelių kraštą ir 10 minučių centrifuguojamas 3000 aps./min. greičiu.

Surenkama 0,12 ml serumo ir perkeliama į agliutinacijos mėgintuvėlį, į kurį įpilama 0,12 ml 1 M kalio hidroksido alkoholio tirpalo. Turinys kruopščiai suplakamas.

Mėgintuvėliai su mėginiais 20 minučių dedami į 60 °C temperatūros vandens vonią hidrolizei.

Mėginiai ataušinami, į juos įpilama 0,12 ml ksileno-oktano mišinio ir intensyviai kratoma 10–15 s. Vėl ataušinami ir centrifuguojami.

Viršutinis sluoksnis, kuriame yra vitamino A ir karotinoidų, atsargiai pašalinamas Pasteuro pipete su gumine kriaukle ir perkeliamas į mikrokiuvetes.

Mėginiai spektrofotometruojami 328 nm bangos ilgiu vitaminui A nustatyti, o karotenoidams – 460 nm bangos ilgiu.

Po spektrofotometrijos mėginiai veikiami ultravioletiniais spinduliais, kad būtų sunaikintas vitaminas A. Šiuo tikslu 15–20 cm atstumu nuo mikrokiuvečių įrengiama kvarcinė (baktericidinė) lempa, kad spinduliuotė apšvitintų skysčiu užpildytą kiuvetės dalį; apšvitinimo laikas yra 45–60 min.

Mėginiai pakartotinai spektrofotometruojami esant 328 nm bangos ilgiui. Vitamino A kiekis nustatomas pagal ekstinkcijos verčių skirtumą (optinį tankį), atsižvelgiant į Bessey apskaičiuotą vitamino A koeficientą (faktorių) 637.

Skaičiavimas atliekamas pagal formulę:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Čia X yra vitamino A kiekis, μg/dl; 637 yra Bessey apskaičiuotas koeficientas vitaminui A nustatyti; E328(1) yra tirpalo optinis tankis prieš apšvitinimą; E328(2) yra tirpalo optinis tankis po apšvitinimo.

Vitamino A koncentracijos perskaičiavimo iš µg/dL į µmol/L koeficientas yra 0,035.

Karotenoidų kiekis apskaičiuojamas pagal formulę:

X = 480-E480,

Čia X yra karotinoidų kiekis, μg/dl; 480 yra Bessey apskaičiuotas koeficientas karotenoidams nustatyti; E480 yra tiriamojo tirpalo optinis tankis.

Pastaba

Pasak Bessey, atliekant tyrimus galima naudoti didesnį ar mažesnį serumo tūrį, tačiau jo santykis su alkoholio tirpalo tūriu turi būti pastovus, keičiantis ksileno-oktano mišinio tūriui (kiekiui).

Normalus vitamino A kiekis kraujo serume yra: naujagimių ir kūdikių – 160–270 μg/l; suaugusiųjų – 1,05–2,45 μmol/l (300–700 μg/l). Karotenoidų kiekis suaugusiųjų kraujo serume yra 800–2300 μg/l.