Hemoblastozių imunofenotipavimas

Pastaraisiais metais reikšminga hematologinių tyrimų pažanga siejama su modernių imunologinių metodų ir automatizuotų periferinio kraujo bei kaulų čiulpų ląstelių analizės ir rūšiavimo priemonių – srauto citometrų – naudojimu. Tradiciniai ligos substrato ląstelių (kraujo, raudonųjų kaulų čiulpų, limfmazgių, blužnies ir kt.) morfologiniai ir citocheminiai tyrimai daugeliu atvejų, ypač limfoproliferacinių ligų atveju, neleidžia nustatyti visos morfologiškai panašių formų variantų įvairovės ir nustatyti patologinio klono kilmės šaltinio. Šias problemas galima išspręsti tik tiriant ląstelių imunologines savybes. Kiekvienas kraujodaros ląstelių diferenciacijos etapas atitinka savo antigenų rinkinį, kuris pagal tarptautinę klasifikaciją vadinamas diferenciacija ir skirstomas į diferenciacijos klasterius, žymimus CD.

Neoplastinių pokyčių atveju diferenciacijos blokas gali įvykti bet kuriame normalios ląstelės vystymosi etape, dėl kurio susidaro patologinių ląstelių klonas, lemiantis ligos substratą ir turintis tas pačias imunologines (arba fenotipines) savybes. Atlikus šių žymenų tyrimus ant ląstelių, galima nustatyti, kokiai ligos formai ir variantui jie atitinka, tai yra, remiantis ląstelių imunologiniu fenotipu, atlikti diferencinę diagnostiką, kuri sunkiausia limfoproliferacinėse ligose, nes pagrindinės ligos patologinio substrato ląstelės yra morfologiškai beveik identiškos ląstelės.

Fenotipavimas leidžia naudoti monokloninius antikūnus blastinėms ir subrendusioms mielo-, mono-, limfocitinių serijų kraujo ląstelėms tipizuoti pagal diferenciacijos antigenų (receptorių) buvimą ląstelės sienelėje. Skyriuje „Organizmo imuninės būklės įvertinimas“ iš dalies aprašomos ląstelių žymenų tyrimo charakteristikos ir diagnostinė vertė; toliau pateikiamas trumpas ląstelių antigenų žymenų aprašymas, susijęs su hemoblastozių diagnoze. Šie antigenai (žymenys) gali būti aptikti kraujo ląstelių ir raudonųjų kaulų čiulpų membranose.

• CD2 yra monomerinis transmembraninis glikoproteinas. Jo yra visų kraujyje cirkuliuojančių T limfocitų paviršiuje ir kai kurių NK limfocitų paviršiuje. CD2 dalyvauja alternatyvios T limfocitų aktyvacijos procese. Klinikinėje praktikoje CD2 nustatymas naudojant monokloninius antikūnus naudojamas ūminės T ląstelių leukemijos, limfomų, lėtinių uždegiminių ir imunodeficito būklių fenotipavimui.
• CD3 yra baltymų kompleksas, susijęs su antigenui specifiniu T ląstelių receptoriumi, tai pagrindinis T limfocitų funkcinis žymuo. Jis palengvina aktyvacijos signalo perdavimą iš membranos į ląstelės citoplazmą. CD3 nustatymas yra indikuotinas ūminės T ląstelių leukemijos, limfomų (CD3 nėra ekspresuojamas ne T ląstelių limfoidiniuose navikuose) ir imunodeficito ligų diagnozei.
• CD4 yra transmembraninis glikoproteinas, kurį ekspresuoja T pagalbininkų (induktoriaus) subpopuliacija, kuri sudaro 45 % periferinio kraujo limfocitų. Ankstyvosiose limfocitų vystymosi stadijose užkrūčio liaukoje CD4 antigenus, taip pat ir CD8, ekspresuoja visi žievės limfocitai. Meduliniai timocitai, kurių fenotipas panašus į subrendusias periferinio kraujo CD4+ T ląsteles (T pagalbininkus), jau ekspresuoja CD4 arba CD8 receptorius. Periferiniame kraujyje iki 5 % ląstelių turi ir CD4, ir CD8 žymenis. Kai kuriose monocitinės serijos ląstelėse galima nedidelė CD4 raiška. CD4 ekspresuojamas daugumoje T ląstelių limfomų atvejų, įskaitant mikozę fungoides, taip pat su HTLV susijusioje T ląstelių leukemijoje (HTLV – žmogaus T limfotropinis virusas).
• CD5 yra vienos grandinės glikoproteinas, esantis visuose subrendusiuose T limfocituose ir daugumoje timocitų, o B limfocitai jį silpnai ekspresuoja. CD5 aptinkamas B ląstelių lėtinės limfocitinės leukemijos ir centrocitinės limfomos navikinėse ląstelėse. Kitų tipų piktybinių limfoidinių ligų – folikulinės limfomos, plaukuotųjų ląstelių leukemijos, didelių ląstelių limfomos – atveju CD5 nėra ekspresuojamas.
• CD7 yra vienos grandinės baltymas, ankstyviausias T ląstelių diferenciacijos žymuo. Jį ekspresuoja pro-T limfocitai dar prieš jiems migruojant į užkrūčio liauką. CD7 aptinkamas daugumoje NK ląstelių, silpna raiška pastebima monocituose. B limfocituose ir granulocituose šio antigeno nėra. CD7 nustatymas naudojamas limfomoms, vaikų T ląstelių limfoblastinei leukemijai diagnozuoti.
• CD8 yra baltymas, sudarytas iš dviejų polipeptidinių grandinių, sujungtų disulfidiniais tilteliais. Jį ekspresuoja citotoksinių ir slopinamųjų T limfocitų pogrupis, kuris sudaro 20–35 % periferinio kraujo limfocitų. Šį antigeną taip pat ekspresuoja NK limfocitai, žievės timocitai, 30 % medulinių timocitų ir raudonųjų kaulų čiulpų ląstelių pogrupis. CD8 tiriamas siekiant kiekybiškai nustatyti T slopinamųjų ląstelių kiekį (žr. skyrių „Slopinamųjų T limfocitų kiekis kraujyje“ aukščiau).

• CD10 yra su ląstelės membrana susijusi endopeptidazė. CD10 ekspresuoja jaunos B limfocitų formos ir žievės limfocitų subpopuliacija. CD10 ekspresuoja visos ALL ląstelės.
• CD11c ląstelių membranose ekspresuoja makrofagai, monocitai, granulocitai, NK ląstelės ir plaukuotųjų ląstelių leukemijos ląstelės.
• CD13 yra glikoproteinas, kurį ekspresuoja mielomonocitų linijos ląstelės (progenitorinės ląstelės, neutrofilai, bazofilai, eozinofilai, monocitai ir mieloidinės leukemijos ląstelės). Jo nėra T ir B limfocituose, eritrocituose ir trombocituose.
• CD14 yra paviršinės membranos glikoproteinas. Jį daugiausia ekspresuoja monocitai ir makrofagai. CD14 aptinkamas daugiau nei 95 % monocitų periferiniame kraujyje ir kaulų čiulpuose. Stipri CD14 raiška stebima sergant ūmine mieloblastine leukemija. Šis antigenas nėra ekspresuojamas sergant ūmine ir lėtine limfoblastine leukemija.
• CD15 yra oligosacharidas. Jis dalyvauja fagocitozėje ir chemotaksėje. Šis antigenas yra subrendusių granulocitų ir Berezovskio-Šternbergo ląstelių paviršiuje. CD15 antigeno ekspresija aptinkama sergant Hodžkino liga. Ne Hodžkino limfomose CD15 daugeliu atvejų neaptinkamas.
• CD16 yra ekspresuojamas granulocitų, monocitų, makrofagų ir NK ląstelių paviršiuje. Visi limfocitai, ekspresuojantys šį antigeną, pasižymi antikūnų priklausomu ląsteliniu citotoksiškumu. CD16 nustatomas tipizuojant lėtines mielocitines leukemijas, siekiant apibūdinti NK ląsteles.
• CD19 yra glikoproteinas, esantis visuose periferiniuose B limfocituose ir visuose B ląstelių pirmtakuose. Jo nėra plazminėse ląstelėse. Tai ankstyviausias B ląstelių žymuo ir atlieka svarbų vaidmenį reguliuojant B ląstelių aktyvaciją ir proliferaciją. CD19 yra ekspresuojamas visose ūminės B ląstelių kilmės leukemijos neoplastinėse ląstelėse ir taip pat yra kai kuriose ūminės monoblastinės leukemijos formose.
• CD20 yra neglikozilintas baltymas. B limfocitų ontogenezėje CD20 antigenas atsiranda po CD19, limfocitų iki B ląstelių diferenciacijos stadijoje. Jo nėra plazminių ląstelių plazminėje membranoje. Jis ekspresuojamas sergant ŪLL, lėtine B ląstelių limfocitine leukemija, plaukuotųjų ląstelių leukemija, Burkitto limfoma ir labai retai – ūmine monoblastine leukemija.
• CD21 yra glikoproteinas, kurio dideliais kiekiais yra limfoidinių organų B limfocituose ir nedideliais kiekiais periferinio kraujo B ląstelėse. CD21 yra Epšteino-Baro viruso receptorius.
• CD22 yra baltymas, sudarytas iš dviejų polipeptidinių grandinių. Jis ekspresuojamas daugumos B limfocitų, įskaitant pirmtakines ląsteles (prolimfocitus), membranose. Po aktyvacijos antigenas ant B limfocitų (plazminių ląstelių) neekspresuojamas. Ryškiausia CD22 raiška aptinkama ląstelėse sergant plaukuotųjų ląstelių leukemija, silpna – mieloidinės leukemijos ir ne T ląstelių ŪLL.
• CD23 yra glikoproteinas, kurį daug labiau ekspresuoja aktyvuoti periferinio kraujo B limfocitai. CD23 tarpininkauja IgE priklausomam citotoksiškumui ir makrofagų bei eozinofilų fagocitozei.
• CD25 yra vienos grandinės glikoproteinas, identifikuojamas kaip mažo afiniteto IL-2 receptorius. Šis receptorius yra ekspresuojamas aktyvuotų T limfocitų paviršiuje ir, mažesniu tankiu, aktyvuotų B ląstelių paviršiuje. Sveikų asmenų periferiniame kraujyje antigenas yra daugiau nei 5 % limfoidinių ląstelių paviršiuje.
• CD29 yra fibronektino receptorius. Jis plačiai paplitęs audiniuose ir jį ekspresuoja leukocitai. CD29 aptikimas periferinio kraujo ląstelėse naudojamas T ląstelių, turinčių CD4+CD29+ fenotipą, pogrupiui, vadinamam 2 tipo pagalbininkėmis (Th2), tipizuoti. Šios ląstelės dalyvauja humoraliniame imuniniame atsake gamindamos limfokinus.
• CD33 yra transmembraninis glikoproteinas. Jo yra mieloidinių ir monocitinių serijų ląstelių paviršiuje. Jis randamas monocitų ir, mažesniu mastu, granulocitų paviršiuje periferiniame kraujyje. Maždaug 30 % raudonųjų kaulų čiulpų ląstelių, įskaitant mieloblastus, promielocitus ir mielocitus, ekspresuoja CD33. Šio antigeno nėra pluripotentinių kamieninių ląstelių membranose. CD33 nustatymas naudojamas mieloidinės kilmės leukemijų ląstelėms apibūdinti. Limfoidinės ir eritroidinės kilmės leukemijos ląstelės CD33 neekspresuoja.
• CD34 yra fosfoglikoproteinas, kurį ekspresuoja kraujodaros pirmtakinės ląstelės, įskaitant monopotentines kamienines ląsteles. Ryškiausia Ag raiška stebima ankstyvosiose pirmtakėse; ląstelėms bręstant, žymenų raiška mažėja. CD34 taip pat randamas endotelio ląstelėse. CD34 nustatymas naudojamas ląstelėms apibūdinti sergant ūminėmis mieloblastinėmis ir limfoblastinėmis leukemijomis. Lėtinėse limfocitinėse leukemijose ir limfomose CD34 antigeno raiška neaptinkama.

• CD41a ekspresuoja trombocitai ir megakariocitai. Monokloniniai antikūnai CD41a aptikimui naudojami megakarioblastinei leukemijai diagnozuoti. Sergant Glancmano trombastenija, šio antigeno raiška nebūna arba yra reikšmingai slopinama.
• CD42b yra membraninis glikoproteinas, sudarytas iš dviejų polipeptidinių grandinių. Žymeklis aptinkamas trombocitų ir megakariocitų paviršiuje. Klinikinėje praktikoje CD42b nustatymas naudojamas trombocitopatijai – Bernard-Soulier sindromui diagnozuoti.
• CD45RA priklauso transmembraninių glikoproteinų klasei. Tai dažnas leukocitų antigenas. Jis ekspresuojamas B limfocitų ląstelių membranose, mažesniu mastu T limfocitų ir subrendusių medulinių timocitų membranose. Granulocitai šio žymens neekspresuoja.
• CD45RO yra mažos molekulinės masės CD45RA, dažno leukocitų antigeno, izoforma. Jis aptinkamas T ląstelėse (atminties T limfocituose), B limfocitų, monocitų ir makrofagų subpopuliacijoje. Monokloniniai antikūnai prieš CD45RO sąveikauja su dauguma timocitų, ramybės būsenos CD4+ ir CD8+ T limfocitų subpopuliacija ir subrendusiomis aktyvuotomis T ląstelėmis. Mielomonocitinės kilmės ląstelės, granulocitai ir monocitai taip pat turi šį antigeną. Jis aptinkamas centroblastinėse ir imunoblastinėse limfomose.
• CD46 yra O-glikozilintas dimeras. Jis plačiai paplitęs audiniuose ir jį ekspresuoja T ir B limfocitai, monocitai, granulocitai, NK ląstelės, trombocitai, endotelio ląstelės, fibroblastai, bet jo nėra raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. CD46 apsaugo audinius nuo komplemento.
• CD61 yra trombocitų antigenas. Jis yra ekspresuojamas periferinio kraujo ir raudonųjų kaulų čiulpų trombocituose, taip pat megakariocituose ir megakarioblastuose. Jo nustatymas naudojamas kaip žymuo ūminei megakarioblastinei leukemijai. Pacientams, sergantiems Glancmano trombastenija, antigeno raiška nebūna arba yra slopinama.
• CD95, dar vadinamas Fas arba APO-1, yra transmembraninis glikoproteinas, priklausantis naviko nekrozės faktoriaus receptorių šeimai. Reikšmingas jo kiekis yra periferinio kraujo T limfocituose (CD4+ ir CD8+) ir, mažesniu mastu, B limfocituose bei NK ląstelėse. Šis antigenas taip pat yra ekspresuojamas granulocituose, monocituose, audinių ląstelėse ir neoplastinėse ląstelėse. CD95 prisijungimas prie Fas ligando (CD95L) sukelia ląstelių apoptozę.
• CD95L, arba Fas ligandas, yra membraninis baltymas, priklausantis naviko nekrozės faktoriaus receptorių šeimai. Šį antigeną ekspresuoja citotoksiniai T limfocitai, NK ląstelės ir labai dažnai naviko ląstelės; jis yra pagrindinis ląstelių apoptozės induktorius.
• HLA-DR yra monomorfinis II klasės žmogaus pagrindinio audinių suderinamumo komplekso (HLA) molekulių determinantas. Žymeklis yra ekspresuojamas Langerhanso ląstelėse, limfoidinių organų dendritinėse ląstelėse, tam tikrų tipų makrofaguose, B limfocituose, aktyvuotose T ląstelėse ir užkrūčio liaukos epitelio ląstelėse. Šio žymens tyrimas naudojamas kiekybiniam aktyvuotų T limfocitų, turinčių CD3+ HLA-DR+ fenotipą, nustatymui.

Naudojant skirtingą monokloninių antikūnų prieš žymenis pasirinkimą, galima sukurti fenotipinį ląstelių portretą, būdingą tam tikrai leukemijos formai.

Be imunofenotipavimo metodų taikymo hemoblastozių diagnostikai ir diferencinei diagnostikai, ypač svarbus pasirodė esąs jų naudojimas gydymo procese, siekiant įvertinti remisijos būseną ir likutinę leukeminių ląstelių populiaciją. Žinant blastinių ląstelių fenotipinį „portretą“ diagnozės laikotarpiu, šie žymenys leidžia aptikti leukeminio klono ląsteles remisijos laikotarpiu, o padidėjus jų skaičiui – numatyti recidyvo vystymąsi gerokai anksčiau (1–4 mėn.) nei pasireiškė jo klinikiniai ir morfologiniai požymiai.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]